Интенсивность образования костномозговых эритроклазических кластеров и происходящего в них экзоцитарного лизиса эритроцитов [1,3], в определённой степени характеризует цитолитическую активность миелокариоцитов [2] и степень их участия в иммунных процессах [4]. Поэтому представляет интерес исследование интенсивности и характера образования эритроклазических кластеров при воспроизведении анафилактического шока у лабораторных животных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Исследования проведены в экспериментах на 20 половозрелых кроликах, массой 2.0 - 2.5 кг, содержащихся в условиях вивария на стандартном рационе питания. Предварительная сенсибилизация животных производилась троекратным подкожным введением сыворотки крови свиней, из расчета 1 мл/кг массы тела кроликов, с интервалом в одну неделю. Разрешающие инъекции сыворотки в дозе 1 мл/кг массы тела производились внутривенно через 7 суток после третьей сенсибилизирующей инъекции [6]. Костный мозг исследовали через неделю после третьей, и через 40-60 минут после инъекции разрешающей дозы сыворотки во время развития проявлений анафилактического шока. Костный мозг получали пункцией эпифизов большеберцовых костей кроликов, проводившейся под местной анестезией 1% раствором дикаина. Мазки аспиратов костного мозга кроликов, фиксировали смесью Никифорова и окрашивали по Романовскому-Гимзе. При подсчете миелограммы определяли вид кластерообразующих миелокариоцитов[5], подсчитывали количество эритроклазических кластеров, а также учитывали наличие или отсутствие в них экзоцитарного лизиса эритроцитов. Таким образом, производилось дифференцированное исследование костномозгового эритроклазического кластерообразования.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ:

Установлено, что общее количество миелокариоцитов в костном мозге подопытных животных при анафилактическом шоке достоверно уменьшалось. Так, через неделю после введения третьей сенсибилизирующей инъекции сыворотки оно составляло 179100±5380/мкл., после введения разрешающей дозы сыворотки - 110200±9370/мкл (Р<0,001). При этом уменьшалось содержание всех видов миелокариоцитов. Так, до развития анафилактического шока в костном мозге животных количество миелокариоцитов нейтрофильного ряда всех стадий зрелости составило 17244±5042/мкл., содержание эозинофильных миелокариоцитов всех стадий развития - 15855±4070/мкл., содержание базофильных миелокариоцитов 1399±461/мкл., лимфоцитов - 8665 ±3473/мкл., миелокариоцитов эритроидного ряда - 36319±8128/мкл. Во время анафилактического шока содержание миелокариоцитов нейтрофильного ряда всех стадий зрелости уменьшилось до 13088±5824/мкл. (Р<0,001), содержание эозинофильных миелокариоцитов - 8269 ±6455/мкл. (Р<0,001), содержание базофильных миелокариоцитов 508±202/мкл., лимфоцитов - 7970±3253/мкл. (Р<0,01), миелокариоцитов эритроидного ряда - 25514±438/мкл. (Р<0,001).

Одновременно наблюдалось изменение интенсивности образования эритроклазических кластеров, и возникновения в них экзоцитарного лизиса эритроцитов. Так, до развития анафилактического шока в костном мозге общее содержание эритроклазических кластеров составляло 15984±756/мкл. из них с экзоцитарным лизисом эритроцитов было - 7028±412/мкл., то есть 44% от общего количества кластеров. При этом эритроклазические кластеры преимущественно были образованы эозинофильными миелокариоцитами. Общее содержание кластеров, образованных ими, составило 5730±1459/мкл., из них 2054±707/мкл. то есть 36% были с экзоцитарным лизисом эритроцитов. Общее содержание эритроклазических кластеров, образованных нейтрофилами, составило 4377±1702/мкл., из них в 797±307/мкл (18%), происходил экзоцитарный лизис эритроцитов. Миелокариоциты эритроидного ряда образовывали 2574±767/мкл. кластеров, из них 633±324/мкл. были с экзоцитарным лизисом эритроцитов (25%). Эритроклазические кластеры образовывали и тромбоцитарные агрегаты, наблюдавшиеся в мазках аспиратов костного мозга. Общее содержание образованных ими эритроклазических кластеров составило 3188±711/мкл., при этом 1956±532/мкл. (61%) были с экзоцитарным лизисом эритроцитов. Следует отметить появление в костном мозге при иммунизации появление эритроклазических кластеров, образованных лимфоцитами [3]. Их общее содержание в костном мозге до анафилактического шока составляло - 2506±609/мкл., из них 864±295/мкл. (34%) были с экзоцитарным лизисом эритроцитов.

Во время анафилактического шока общее содержание эритроклазических кластеров, несмотря на уменьшение числа миелокариоцитов возрастало, и было равным 17129±855/мкл. (Р<0,001). Абсолютное содержание эритроклазических кластеров с экзоцитарным лизисом эритроцитов уменьшалось и составляло 6606±280/мкл. (39%) (Р<0,001). Общее содержание эритроклазических кластеров, образованных эозинофильными миелокариоцитами, уменьшалось до 5237±186/мкл. (Р<0,001), тогда как, их содержание с экзоцитарным лизисом эритроцитов увеличилось 3250±1534/мкл. (62%) (Р<0,001). Общее содержание эритроклазических кластеров, образованных нейтрофилами, и содержание эритроклазических кластеров с экзоцитарным лизисом эритроцитов при анафилактическом шоке достоверно не изменялись. Общее содержание кластеров, образованных миелокариоцитами эритроидного ряда и содержание эритроклазических кластеров с экзоцитарным лизисом эритроцитов уменьшились и составили 2087±802/мкл., и 183±105/мкл. (9%) (Р<0,001), соответственно. Общее содержание тромбоцитарных эритроклазических кластеров и их количество с экзоцитарным лизисом эритроцитов уменьшились и составили соответственно 2272±752/мкл., и 1387±559/мкл. (61%) (Р<0,001). Общее содержание и содержание лимфоцитарных эритроклазических кластеров с экзоцитарным лизисом эритроцитов увеличились, и они составили соответственно 3420±1732/мкл., и 1044±508/мкл. (31%) (Р<0,001).

Таким образом, при анафилактическом шоке в костном мозге происходит уменьшение содержания миелокариоцитов за счёт снижения количества нейтрофильных миелокариоцитов, плазматических клеток, моноцитов и делящихся клеток. Это может быть связано с их выходом из костного мозга в периферическую кровь и последующим депонированием в сосудах малого круга при развитии анафилактического шока [7]. Увеличение содержания в костном мозге эозинофильных миелокариоцитов может быть обусловлено активацией их генерации во время иммунного ответа [7]. Нарастание количества лимфоцитарных эритроклазических кластеров вероятнее всего вызвано активацией иммунной системы в процессе сенсибилизации кроликов. Следует отметить, что изменение абсолютных величин общих количеств эритроклазических кластеров, образованных различными видами миелокариоцитов сопровождалось сохранением соотношения относительных величин количеств эритроклазических кластеров с экзоцитарным лизисом эритроцитов и без него. Так до анафилактического шока относительное содержание кластеров с лизисом составляло 44%, при анафилактическом шоке 39%. Это можно рассматривать как свидетельство существования активного субклона миелокариоцитов, осуществляющего экзоцитарный лизис эритроцитов. Таким образом, развитие анафилактического шока сопровождается уменьшением клеточности костного мозга, активацией образования лимфоцитами костного мозга эритроклазических кластеров и увеличением их цитолитической активности.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Бельченко Д.И. // Клиническая лабораторная диагностика.- 1993. - № 4. - С.9-13.
2. Бельченко Д.И., Кривошеина Е.Л. // Гематология и трансфузиология. - 1999. - Т. 44. - № 5. - С. 18-21.
3. Бельченко Д.И. Диплом на открытие «Явление образования в костном мозге млекопитающих эритроклазических костномозговых кластеров» выдан международной ассоциацией авторов научных открытий. - 2001.
4. Бельченко Д.И. // Аллергология и иммунология том.4, №3 2003г
5. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д., Шубин Н.Г. «Гематология животных» Томский ун-т г. Томск 1973г.
6. Фоломеев В.Ф., Смирнова В.В., Демидова М.А. // Аллергические реакции в эксперименте и клинике (сборник научных трудов) М. 1986г.
7. Ярилин А.А. «Основы иммунологии» Москва, «Медицина» 1999г.