Scientific journal
Advances in current natural sciences
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,823

Предшествующими исследованиями (Кейлис-Борок И.В., 1979; Фриденштейн А.Я., Лурия Е.А., 1980; Лурия Е.А. с соавт., 1989; Лебединская О.В., 1999 и др.) доказано наличие в биологических жидкостях организма циркулирующих стромальных клеток-предшественников (КОК-ф).

В данной работе исследованы морфологические особенности колоний, формируемых клетками-предшественниками стромы в монослойных культурах одной из важнейших биологических жидкостей - перитонеального транссудата.

Опыты проводились на крысах линии Wistar. Для извлечения клеток перитонеального транссудата забитым животным вводили интраперитонеально 10 мл среды 199, содержащей 250 Ед гепарина и 800 мг гентамицина, затем отсасывали содержимое и пропитывали полость еще раз 10 мл среды. Клеточные суспензии эксплантировали в культуральные матрасы в 5 мл среды α-МЕМ с телячьей сывороткой по 1х105 - 10х106 ядросодержащих клеток на матрас.

Исследовались полные и адгезивные культуры с добавлением фидера и при его отсутствии. В качестве фидера использовали облученные костномозговые клетки морской свинки, содержащие тромбоцитарные ростовые факторы, которые, как известно, необходимы для пролиферации КОК-ф костного мозга мышей и крыс.

Колонии, сформированные циркулирующими в перитонеальном транссудате клетками-предшественниками, окрашивали азур II-эозином и подсчитывали процентное содержание трех типов колоний, содержащих не менее 50 клеток.

Каждая из колоний представляет собой клон, состоящий из фибробластов. Первый тип - компактные колонии - содержат фибробласты, типичные по форме, обладающие высоким пролиферативным потенциалом, что обусловливает их плотное расположение в одном или нескольких центрах. Второй тип - диффузные колонии - характеризуются наличием в своем составе фибробластов, разобщенных между собой и свободно располагающихся в пределах колонии. Третий тип колонии содержит сквамозные фибробласты - крупные округлые или малоотростчатые клетки с множественными вакуолями в цитоплазме. Три морфологических типа колоний отражают степень пролиферативной активности входящих в них клеток: максимальную - в компактных колониях и минимальную - в колониях, содержащих сквамозные клетки.

Результаты исследований показали, что преобладание того или иного типа колоний зависит от плотности эксплантируемых клеток и наличия фидера в культурах. Максимальное количество пролиферативно-активных компактных колоний наблюдалось при эксплантации 3х105 ядросодержащих клеток при добавлении фидера и от 1х105 до 5х105 клеток на матрас без фидера. Причем введение фидера в культуры с данной концентрацией клеток приводило почти к 100-процентному образованию колоний компактного типа (98,5%). Увеличение количества эксплантируемых клеток до 1,5х106 на матрас при наличии фидера и до 10х106 в полных и адгезивных культурах без фидера вызывало резкий рост числа колоний, содержащих сквамозные клетки.

Таким образом, оптимальное соотношение количества эксплантируемых клеток в культуре и концентрации фидера позволяет в полной мере проявить пролиферативные возможности стромальных клеток-предшественников, выявленных в перитонеальном транссудате крыс.