Клонирование М-сегмента вируса ГЛПС в вектор рGEM-T EASY
Мухаметханов Н. Х. , Кулагин В. В. , Алсынбаев М. М. , Ткаченко Е. А.
Вирус ГЛПС серотип Пуумала (PUUV) относится к роду Хантаан (Hantaan) семейства Буньявириде (Bunyaviridae),является основным серотипом, циркулирующий на территории республики Башкортостан и вызывает геморрагическую лихорадку с почечным синдромом. ГЛПС занимает ведущее место среди природно-очаговых инфекций в Башкирии и встречается почти во всех городах и районах республики, составляя более 40% заболеваемости на всей территории Российской Федерации.Актуальность проблемы обусловлена отсутствием тенденции к снижению заболеваемости и отсутствием вакцины. Разработанная южно-корейскими исследователями вакцина на основе пассирования вируса в мозге мышей-сосунков сопряжена с трудоемкостью технологического процесса и опасностью заражения персонала. В связи с чем, перспективным направлением является разработка генно-инженерной вакцины на основе М-сегмента вируса ГЛПС, который кодирует поверхностные гликопротеины G1 и G2. Была выделена вирусная РНК из культуры зараженных клеток Vero E6 гуанидинфенолхлороформным методом , осажденна 2V этанола и растворена в DEPC-обработанной воде с добавлением ингибитора РНКазы. Синтезирована кДНК с использованием прямого праймера 5´-gga gga ccg cca tgg gag aac tta gtc cag-3´. Проведена амплификация сегмента с дополнительным обратным праймером 5´-tta ggg ctt atg ttc ttt cct gta act agg tct-3´. Полученный ПЦРпродукт клонирован в вектор рGEM-T Easy. Штамм E.coli JM109 был трансформирован и высеян на селективную среду содержащую ампициллин +IPTG+Xgal. Колонии с рекомбинантной плазмидой отобраны для дальнейшей работы.
Библиографическая ссылка
Мухаметханов Н. Х., Кулагин В. В., Алсынбаев М. М., Ткаченко Е. А. КЛОНИРОВАНИЕ М-СЕГМЕНТА ВИРУСА ГЛПС В ВЕКТОР РGEM-T EASY // Успехи современного естествознания. 2003. № 11. С. 72-72;
URL: https://www.natural-sciences.ru/article/view?id=15271 (дата обращения: 22.08.2026).
URL: https://www.natural-sciences.ru/article/view?id=15271 (дата обращения: 22.08.2026).
