Научный журнал
Успехи современного естествознания
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,823

ЛИПИДНЫЙ СПЕКТР В КЛЕТКАХ ПЕЧЕНИ И ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ У ДЕТЕЙ ПРИ РАЗНЫХ СТАДИЯХ ХРОНИЗАЦИИ ГЕПАТИТА С

Булыгин В.Г. 1
1 ФГБУ «НИИ медицинских проблем Севера» СО РАМН
В клетках ткани печени, полученной при прицельной биопсии, и в лимфоцитах, выделенных из венозной крови, методом тонкослойной хроматографии на силуфоле с экстракцией из клеток липидных фракций изучены показатели липидного состава у 26 детей в возрасте 12-16 лет, больных хроническим вирусным гепатитом С (по 13 человек со 2-й и 3-й стадиями хронизации процесса). В результате проведенных исследований установлено, что при хроническом вирусном гепатите С у детей интенсивность реакций метаболизма, определяемая по показателям липидного спектра клеток, в гепатоцитах и лимфоцитах зависит от стадии хронизации инфекционного процесса и при 3-й его стадии отмечаются более глубокие, чем при 2-й, поражения клеток печени и лимфоцитов.
дети
хронический вирусный гепатит С
стадии хронизации
печень
лимфоциты
липиды
метаболизм
1. Арямкина, О.Л. Хроническая HBV- и HCV-инфекция и рак печени: клинико-эпидемиологические и дифференциально-диагностические параллели / О.Л. Арямкина // Эпидемиология и инфекционные болезни. – 2006. – №2. – С. 36–39.
2. Булыгин, В.Г. Параметры метаболизма в лимфоцитах крови у больных хроническим вирусным гепатитом В / В.Г. Булыгин, Е.П. Тихонова, Н.А. Аксенова, Г.В. Булыгин // Сибирское медицинское обозрение. – 2010. – Т. 62, №2. – С. 33–36.
3. Нарциссов, Р.П. Проблемы прогнозирова­ния здоровья детей. Медицина и здравоохранение (серия: ох­рана материнства и детства): обзорная информация. / Р.П. Нарциссов, Е.И. Степанова. – М., 1987. – 36 с.
4. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных: Применение пакета прикладных программ Statistica / О.Ю. Реброва. – М.: Медиасфера, 2002. – 312 с.
5. Рейзис, А.Р. Современные проблемы вирусного гепатита С у детей и подростков / А.Р. Рейзис // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. – 2003. – №5. – С. 23–26.
6. Серов, В.В. Морфологические критерии оценки этиологии, степени активности и стадии процесса при вирусных хронических гепатитах В и С / В.В. Серов, Л.О. Севергина // Архив патологии. – 1996. – №4. – С. 61–64.
7. Тихонова, Е.П. Метаболические основы иммунореактивности при парентеральных гепатитах В и С / Е.П. Тихонова, Г.В. Булыгин. – Новосибирск: Наука, 2003. – 148 с.
8. Шахгильдян, И.В. Хронические вирусные гепатиты в Российской Федерации / И.В. Шахгильдян, А.А. Ясинский, М.И. Михайлов и др. // Клинико-эпидемиологические и этно-экологические проблемы заболеваний органов пищеварения: материалы восьмой Восточно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием и Красноярской краевой гастроэнтерологической конф., 17–18 апреля 2008 г. – Красноярск, 2008. – С. 246–253.
9. Boyum, A. Separation of blood leucocytes, granulocytes and lymphocytes / А. Boyum // Tissue Antigens. – 1974. – Vol. 4. – P. 250–260.
10. Folch, J. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues / J. Folch, M. Lees, G. Sloane-Stanley // J. Biol. Chem. – 1957. – Vol. 226, N1. – P. 497-509.

В нашей стране, как и во всем мире, эпидемиологическая ситуация по хроническому вирусному гепатиту С на сегодняшний день весьма неблагополучна [8], что убедительно подтверждается его широкой распространенностью, все более частой регистрацией среди лиц молодого возраста, значительной ролью в формировании цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [1, 5]. Высокая заболеваемость, поражение не только взрослого трудоспособного населения, но и детского контингента, определяют актуальность данной проблемы и ее трансформацию из медицинской в медико-социальную.

На сегодняшний день приоритетными при хронических гепатитах являются исследования внутриклеточных процессов в организме [2], позволяющие усовершенствовать применяемые методы лечения, сделать их более обоснованными с точки зрения патогенеза и тем самым облегчить течение и отдалить неблагоприятные исходы этих заболеваний.

Известно, что в патогенезе хронического гепатита С важная роль принадлежит иммунной системе, ее способности к распознаванию возбудителя и дальнейшему формированию полноценного иммунного ответа. Физиологической единицей, в первую очередь контактирующей с вирусом, является иммунокомпетентная клетка, функциональное состояние которой и обусловливает адекватность реагирования. Функциональные возможности лимфоцита, как и любой другой клетки организма, в значительной степени определяются ее внутриклеточным метаболизмом, обеспечиваемым, в числе прочего, определенным уровнем липидного спектра [7].

Несмотря на многочисленные исследования, проведенные при хроническом вирусном гепатите С, и на достигнутые успехи в данной области, многие вопросы этой болезни еще не нашли своего окончательного решения. Одним из них является изучение особенностей изменений процессов метаболизма в организме ребенка, зависящих от стадии хронизации указанного заболевания. Использование липидных параметров, определяемых в гепатоцитах и лимфоцитах при разных стадиях хронизации гепатита С, окажет, на наш взгляд, существенную помощь в получении более полной картины метаболических изменений, так как известно, что внутриклеточный обмен в лимфоцитах способен отражать указанные процессы целостного организма [3].

Цель исследования – изучение показателей липидного состава в клетках печени и лимфоцитах крови у детей, больных хроническим гепатитом С, и определение зависимости этих параметров от стадии хронизации заболевания.

Материалы и методы исследования

Обследовано 26 детей в возрасте от 12-и до 16-и лет с диагнозом «Хронический вирусный гепатит C», который устанавливался в условиях специализированного стационара с помощью набора стандартных клинико-биохимических и иммуноферментных методов исследования и подтверждался морфологически при пункционной биопсии печени (под контролем УЗИ) с учетом гистологического индекса степени активности (ГИСА), а также гистологического индекса стадии хронизации (ГИСХ) – по В.В. Серову [6]. При этом у 13 человек определена 2-я стадия хронизации процесса (слабая или умеренная степень активности заболевания с умеренно выраженными фиброзными изменениями в печени) и еще у 13 – 3-я стадия хронизации (слабая или умеренная степень активности с тяжелым фиброзом в печени).

Материал, полученный при биопсиях, использовался и для определения в ткани печени показателей липидного состава клеток. Параметры липидного спектра (фосфолипиды (ФЛ), холестерин (ХОЛ), свободные жирные кислоты (СЖК), триацилглицериды (ТАГ) и эфиры холестерина (ЭХ)) исследовались методом тонкослойной хроматографии на силуфоле с экстракцией из клеток печени липидных фракций по J. Folch et al. [10].

Аналогичным образом перечисленные выше показатели были изучены и в лимфоцитах, выделенных из венозной крови этих же больных на градиенте плотности (1,077 г/мл) фиколл-верографина [9].

Полученные в результате исследований данные были обработаны методами статистического анализа, используемыми в биологии и медицине с применением пакета прикладных программ Statistica [4]. В таблицах представлены среднегрупповые показатели (М) и ошибка средней (m). Оценка достоверности различий проводилась с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.

Результаты исследования и их обсуждение

В результате проведенных исследований выявлен ряд достоверных различий между показателями липидного состава клеток печени в группах, отличающихся друг от друга по стадии хронизации инфекционного процесса (табл. 1).

Таблица 1

Содержание липидов ( %) в клетках печени у детей при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С (M±m)

Показатели

2-я стадия хронизации, n=13

3-я стадия хронизации, n=13

1

2

ФЛ

11,96±0,61

11,63±0,81

ХОЛ

13,92±0,99

17,39±1,31

p1<0,05

СЖК

16,03±1,23

23,01±1,15

p1<0,001

ТАГ

18,30±0,91

14,93±0,84

p1<0,05

ЭХ

40,06±0,64

33,05±2,12

p1<0,01

ХОЛ/ФЛ

1,19±0,06

1,53±0,13

p1<0,05

СЖК/ТАГ

0,91±0,10

1,56±0,10

p1<0,001

Так, например, в клетках печени у больных с 3-й стадией хронизации инфекционного процесса количество ХОЛ определяется на большем уровне, чем в клетках детей со 2-й стадией: 17,39±1,31 и 13,92±0,99, соответственно, p<0,05. За счет повышения количества холестерина при 3-й стадии увеличивается и соотношение ХОЛ/ФЛ, по сравнению с этим же показателем, определяемым при 2-й стадии: 1,53±0,13 и 1,19±0,06, p<0,05. Вместе с тем, содержание ЭХ при 3-й стадии определяется ниже, чем при 2-й: 33,05±2,12 и 40,06±0,64, p<0,01.

Кроме того, при 3-й стадии увеличивается количество СЖК в клетках печени по сравнению со 2-й (23,01±1,15 и 16,03±1,23, p<0,001), а содержание ТАГ, в свою очередь, снижается (14,93±0,84 и 18,30±0,91, p<0,05). В связи с этим, соотношение СЖК/ТАГ у больных с 3-й стадией больше, чем при 2-й: 1,56±0,10 и 0,91±0,10, p<0,001.

Таким образом, в результате наших исследований установлено, что показатели липидного спектра клеток печени у детей с 3-й стадией хронизации вирусного гепатита С отличаются от аналогичных параметров у детей со 2-й стадией хронизации этого заболевания по следующим пунктам:

  • более высоким количеством холестерина, и, как следствие, повышенным соотношением ХОЛ/ФЛ, что определяет увеличение микровязкости и снижение проницаемости клеточных мембран (следовательно, и лучшую защиту от перекисного окисления липидов);
  • меньшим содержанием эфиров холестерина, что косвенно подтверждает активацию синтеза самого холестерина;
  • повышенным содержанием свободных жирных кислот, сниженным количеством триацилглицеридов и увеличенным, в связи с этим, соотношением СЖК/ТАГ, что свидетельствует о преимущественной направленности липидного обмена в сторону липолиза.

При сравнении липидных параметров лимфоцитов в группах больных детей, отличающихся друг от друга по стадии хронизации гепатита С, также выявлены достоверные различия между исследованными показателями (табл. 2).

Таблица 2

Содержание липидов ( %) в лимфоцитах крови у детей при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С (M±m)

Показатели

2-я стадия хронизации, n=13

3-я стадия хронизации, n=13

1

2

ФЛ

17,26±0,60

31,49±1,33

p1<0,001

ХОЛ

22,86±2,39

20,35±2,40

СЖК

11,36±0,40

8,85±0,78

p1<0,01

ТАГ

9,30±0,47

6,78±0,43

p1<0,001

ЭХ

40,20±1,51

31,63±1,20

p1<0,001

ХОЛ/ФЛ

1,44±0,22

0,68±0,09

p1<0,01

СЖК/ТАГ

1,15±0,02

1,25±0,10

Например, количество ФЛ в лимфоцитах детей с 3-й стадией хронизации заболевания больше, чем в лимфоцитах больных со 2-й стадией: 31,49±1,33 и 17,26±0,60, p<0,001. В соответствии с этим, соотношение ХОЛ/ФЛ в этих клетках при 3-й стадии меньше, по сравнению со 2-й (количество ХОЛ недостоверно меньше при 3-й стадии): 0,68±0,09 и 1,44±0,22, p<0,01.

В то же время, содержание СЖК и ТАГ при 3-й стадии хронизации процесса определяется на меньших уровнях, чем при 2-й: СЖК – 8,85±0,78 и 11,36±0,40, p<0,01; ТАГ – 6,78±0,43 и 9,30±0,47, p<0,001.

В свою очередь, количество ЭХ при 3-й стадии меньше, чем при 2-й: 31,63±1,20 и 40,20±1,51, p<0,001.

Таким образом, в результате наших исследований установлено, что отличия параметров липидного спектра лимфоцитов крови детей с 3-й стадией хронизации вирусного гепатита С от аналогичных показателей детей со 2-й стадией хронизации данного заболевания заключаются в следующем:

  • повышенном содержании фосфолипидов и меньшем соотношении ХОЛ/ФЛ, что приводит к снижению микровязкости и лучшей проницаемости клеточных мембран лимфоцитов и определяет снижение уровня защиты этих клеток от перекисного окисления липидов;
  • меньшем количестве эфиров холестерина, что может указывать на менее интенсивный внутриклеточный метаболизм самого холестерина (содержание ХОЛ при 3-й стадии недостоверно меньше, чем при 2-й), продуктом эстерификации которого и являются ЭХ;
  • менее высоком содержании свободных жирных кислот и триацилглицеридов, что может свидетельствовать о менее активном жирнокислотном обмене с одновременным его сдвигом в сторону липогенеза.

В заключение можно отметить, что установленные в результате наших исследований особенности внутриклеточного обмена, характерные для клеток печени и лимфоцитов, в зависимости от стадии хронизации гепатита С у детей 12-16-и лет и проводимые в этом направлении дальнейшие исследования позволят, по-нашему мнению, уточнить некоторые метаболические аспекты патогенеза хронического вирусного гепатита С, обусловленные тяжестью его течения (стадией хронизации), определить новые подходы в лечении и прогнозах течения указанного заболевания в детском возрасте.

Выводы

  1. Величина показателей липидного состава в клетках печени детей в возрасте 12-16-и лет, больных хроническим вирусным гепатитом С, зависит от стадии хронизации инфекционного процесса. Изменения липидных параметров, выявляемые при 3-й стадии хронизации, свидетельствуют о более глубоком, чем при 2-й, функциональном поражении клеток печени.
  2. В лимфоцитах крови у детей 12-16-и лет при хроническом вирусном гепатите С изменения липидных показателей также зависят от его стадии хронизации и предполагают наличие более выраженных метаболических нарушений в этих клетках при 3-й стадии, по сравнению со 2-й.

Библиографическая ссылка

Булыгин В.Г. ЛИПИДНЫЙ СПЕКТР В КЛЕТКАХ ПЕЧЕНИ И ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ У ДЕТЕЙ ПРИ РАЗНЫХ СТАДИЯХ ХРОНИЗАЦИИ ГЕПАТИТА С // Успехи современного естествознания. – 2014. – № 5-1. – С. 25-28;
URL: http://www.natural-sciences.ru/ru/article/view?id=33845 (дата обращения: 15.06.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074