Материалыиметоды. В исследовании использовались 42 клинических штамма грибов рода Candida, полученных при микробиологическом обследовании пациентов с подозрением на кандидозный процесс. Данные штаммы культивировались 48 часов на среде Сабуро, дважды отмывались буферным раствором при центрифугировании (3000 об/мин в течение 15 мин). Для приготовления антигена грибные клетки прогревались при 80˚ С в течение 1 часа на водяной бане, для стимуляции цитокинопродукции использовалась суспензия, содержащая 10 в 7 степени кл/мл. При постановке использовалась цельная периферическая гепаринизированная кровь донора, разведенная средой RPMI 1640 с глутамином в соотношении 1:5. Кровь и грибной антиген в соотношении 1:1 помещались в иммунологический планшет. В качестве контроля (оценка спонтанной индукции) использовалась кровь с добавлением культуральной среды без грибного антигена. Планшеты инкубировались 72 часа (для IFN-gamma) и 24 часа (для остальных цитокинов) в условиях эксикатора (37˚С, 0,5 % СО2). После инкубации сняты супернатанты, разделены на малые порции и заморожены при -70˚ С. Определение количества цитокинов в супернатантах производилось методом ИФА с использованием специальных тестсистем (производство ЗАО «Вектор-Бест» г. Новосибирск, Россия, ООО «Цитокин» г. Санкт-Петербург, Россия).
Так как клетки крови при манипуляциях способны к спонтанной выработке цитокинов, при анализе результатов важно оценить не столько абсолютные значения содержания цитокинов в супернатантах, сколько отношение уровня индуцированной цитокинопродукции к уровню спонтанной.
Результаты. Средние значения производства выбранных цитокинов следующие содержание:
IL-1α в супернатантах
- без индукции (спонтанная продукция) - 2,22±0,1пг/мл,
- под воздействием индукции грибами (индуцированная продукция) - 29,24 ± 7,56 пг/мл.,
- соотношение индуцированная/спонтанная -10,93±5,14
TNF-α :
- спонтанная продукция 6,89±0,48 пг/мл
- индуцированная - 180,43 ± 84,12 пг/мл
- соотношение индуцированная / спонтанная 38,18±18,06
IL-4 :
- спонтанная продукция - 2,59 ± 0,32 пг/мл
- индуцированная - 4,49 ± 2,13 пг/мл
- соотношение индуцированная/спонтанная 1,77±0,95
IFN-γ:
- спонтанная продукция -1023,0 ± 0 пг/мл
- индуцированная - 994,32 ± 25,86 пг/мл
- соотношение индуцированная / спонтанная 0,97±0,07
Таким образом, при совместном культивировании клеток крови донора с антигеном, полученным из клинических штаммов грибов рода Candida, in vitro через 24 часа в супернатантах фиксируется активная наработка провоспалительных цитокинов (IL-1α, TNF-α) и низкий уровень противовоспалительного-IL4. Примечателен тот факт, что IFN-γ синтезируется слабо под воздействием грибного антигена даже через 72 часа.
Библиографическая ссылка
Поспелова А.В., Бурмистрова А.Л., Хомич Ю.С., Самышкина Н.Е., Бахарева Л.И. ВЛИЯНИЕ ГРИБОВ РОДА CANDIDA НА СИНТЕЗ ЦИТОКИНОВ ИММУННЫМИ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO // Успехи современного естествознания. – 2006. – № 2. – С. 86-86;URL: https://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=14263 (дата обращения: 19.04.2024).