Целью данной работы явилось изучение функционального состояния гранулоцитов донорских лейкоцитных концентратов, подвергавшихся холодовому гипобиозу (-100С) и холодовому анабиозу (-200С, -400С) с использованием оригинальных криозащитных растворов, не требующих отмывания от биообъекта и экспоненциальной программы охлаждения.
В состав незамерзающего хладоограждающего раствора для температуры -100С были включены следующие ингредиенты: криопротектор - глицерин, антиоксидантное средство -оксиметилэтилпиридина сукцинат (ОМЭПС), плазмозамещающий раствор - желатиноль, для доведения рН раствора до физиологической нормы 7,2-7,4 использован 2 м раствор NaOH.
Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов до -400С (патент РФ №2184449, 2001 г.) включал в себя: криопротектор - вещество А-378, антиоксидант - фумарат натрия и воду для инъекций, лимонную кислоту применяли для достижения рН раствора физиологической нормы.
При температуре -200С использовали раствор (патент РФ №2240000, 2004 г.), состоящий из криопротектора А-378, средства - ОМЭПС и воды для инъекций, рН раствора доводили до 7,2-7,4 с помощью 2 м раствора NaOH.
Каждый из указанных растворов смешивали в пластикатном контейнере в соотношении 1:1 с нативным донорским лейкоконцентратом, полученным путем цитафереза, выдерживали 20 мин при комнатной температуре и погружали в металлическую ванну, заполненную 960 этанолом, охлажденным до -100С (для гипобиоза) или до -280С (для анабиоза), которая находилась в электроморозильнике «Криостат». В опытах с температурой -400С (или -200С) контейнеры с биообъектом, охлажденные до -280С (или до -200С соответственно) затем переносили в холодильник на -400С (или на -200С) для дальнейшего замораживания. Экспоненциальные программы (ЭП) охлаждения (гипобиоз) или замораживания (анабиоз) биообъекта для каждой из исследуемых температур представлены на рис.1.
Таблица 1. Экспоненциальные программы (ЭП) охлаждения (гипобиоз) или замораживания (анабиоз) биообъекта
Охлажденный биообъект выдерживали при -100С до 14 суток, а замороженный при -200С до 110 суток и при -400С до 60 суток, после чего осуществляли отогрев или размораживание в 20-и литровой водяной ванне при температуре +380С в течение 2 сек (для -100С), 35-40 сек (для -200С) и 45-60 сек (для -400С) при интенсивном покачивании контейнера с биообъектом.
Установлено, что оптимальным сроком сохранения функции гранулоцитов охлажденных до -100С являются 12 суток (n=6), при которых в лейкоцитных концентратах сохраняется 82,18±3,64% гранулоцитов от исходного (до охлаждения) уровня, среди которых способностью к фагоцитозу (пробы с латексом) обладали 75,72±4,33% нейтрофилов.
Для температуры -200С оптимальным сроком являются 21 сутки (n=7), когда из 88,71±8,48%, размороженных гранулоцитов, фагоцитарная активность наблюдается у 71,67±10,82% нейтрофилов.
Наиболее благоприятным сроком сохранения функции гранулоцитов при -400С оказались 30 суток (n=7), через которые сохраненными оказались 87,29±10,83% гранулоцитов, среди них 96,0±4,00% нейтрофилов обладают способностью к фагоцитозу.
Таким образом, сохранение функции гранулоцитов крови человека возможно через разные сроки и при различных отрицательных температурах, если используются эффективные криозащитные растворы и щадящая программа охлаждения/замораживания. Предложенные криотехнологии являются доступными и не требуют дорогостоящего оборудования, поэтому могут найти применение в медицинских, микробиологических, ветеринарных и ихтиологических исследованиях.
Библиографическая ссылка
Сведенцов Е.П, Туманова Т.В., Степанова Е.С., Деветьярова О.Н., Щеглова О.О. ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ГРАНУЛОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА, ПОДВЕРГАВШИХСЯ ХОЛОДОВОМУ ГИПО- И АНАБИОЗУ // Успехи современного естествознания. – 2005. – № 4. – С. 38-39;URL: https://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=8306 (дата обращения: 20.04.2024).