Научный журнал
Успехи современного естествознания
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,823

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НАДФ-ИЗОЦИТРАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ В НОРМЕ, ПРИ ВВЕДЕНИИ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ-A И ДЕЙСТВИИ МЕЛАТОНИНА

Цветикова Л.Н. Попова Т.Н.
Стимуляция рецепторов различных типов клеток фактором некроза опухоли-α (ФНО-α) вызывает возрастание внутриклеточного уровня активных форм кислорода. ФНО-α является ключевым медиатором разнообразных биологических процессов, включая лихорадку, септический шок, повреждение тканей, некроз опухоли и апоптоз, ряда инфекционных и неинфекционных заболеваний, включая гепатиты /1/. Работа глутатионпероксидазной/глутатионредуктазной антиоксидантной системы происходит при постоянном притоке НАДФН, образующегося в ходе функционирования пентозофосфатного пути, а также за счет реакции, катализируемой НАДФ изоцитратдегидрогеназой (НАДФ-ИДГ, К.Ф. 1.1.1.42.).  Рядом авторов было выявлено, что мелатонин обладает гепатопротекторными свойствами и способствует нормализации биохимических процессов при развитии оксидативного стресса /2/. В связи с этим было проведено исследование некоторых кинетических параметров НАДФ-ИДГ из печени крыс в норме, при введении ФНО-α и действии мелатонина.

В качестве объекта исследования использовались самцы белых лабораторных крыс, содержащиеся на стандартном режиме вивария. Для индукции апоптоза животным вводили актиномицин D внутрибрюшинно в дозе 20мкг на кг веса животного, а затем через 20 минут вводили ФНО-α (1мкг/кг) /1/.

Мелатонин вводили животным после индуцирования апоптоза внутрибрюшинно (2 мг/кг) троекратно с интервалов в 3 часа. Материал для исследований забирали через 12 часов после введения ФНО-α, что связано с максимальным уровнем развития свободнорадикальных процессов к этому времени /2/ . Активность НАДФ-ИДГ определяли на СФ-56 при длине волны 340 нм.

Нами было выявлено повышение активности НАДФ-ИДГ в гомогенате печени крыс при введении ФНО-α в 1,5 раза по сравнению с интактными животными. Введение мелатонина на фоне апоптоза приводило к снижению активности НАДФИДГ на 10% по сравнению с животными, которым вводили ФНО-α.

Изучение субклеточной локализации НАДФИДГ из печени всех исследованных групп показало, что активность фермента на 85% связана с цитоплазматической активностью, при этом на митохондриальную фракцию приходиться около 15% активности.

Электрофорез в ПААГ свидетельствует о том, что ферментные препараты НАДФ-ИДГ из печени крыс в норме, при введении ФНО-α и действии мелатонина, полученные после процедуры очистки фермента, финальной стадией которой являлась гельхромотография на Toyoperl HW-65, во фракциях с максимальной активностью, были гомогенны. Значения электрофоретической подвижности для НАДФ-ИДГ из печени крыс при проявлении на белок совпадали (Rf=0,55±0,02). Следует отметить, что значение Rf для полос, получаемых после специфического проявления НАДФ-ИДГ, из цитоплазматической фракции грубого тканевого экстракта совпадало с величиной Rf, обнаруженной при проявлении на белок.

Молекулярная масса НАДФ-ИДГ из печени крыс в норме, при патологии и действии гепатопротектора, определенная методом гельфильтрации через колонку с  Toyopearl HW-65, составила 112 ±5,8 кДа.

При введении ФНО-α наблюдается уменьшение Кm по отношению к НАДФ + и Mn 2+ и увеличение Км по отношению к изоцитрату по сравнению с нормой. Введение мелатонина на фоне развития апоптоза способствует изменению значений Км для данного фермента по отношению к ИЦ, НАДФ + и Mn 2 в сторону контрольных параметров.

При исследовании зависимости активности НАДФ-ИДГ от концентрации ионов водорода выявлено смещение рН-оптимума в зону более кислых значений при развитии апоптоза. Однако при введении мелатонина на фоне развития апоптоза наблюдается тенденция к возрастанию данного параметра, тем самым введение мелатонина способствует приближению значений оптимальных рН к таковым в условиях нормы.

По-видимому, действие мелатонина на фоне развития апоптоза изменяет состояние свободно радикального гомеостаза за счет проявления его антиоксидантного свойства, что сказывается на величинах физико-химических параметров НАДФ-ИДГ из печени крыс по сравнению с данными при введении ФНО-a.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

  1. Effect of hepatocyte apoptosis induced by TNF-б on acute severe hepatitis in mouse models / Zang G.Q. [ et al.] // World J Gastroentero. -. 2000. - V. 6, №. 5. P. 688-692.
  2. Reiter R.J., Tan D.X., Qi W. Suppression of oxygen toxicity by melatonin// Acta Pharmacol. Sinica1998.-Vol.19.-P.575-581

Библиографическая ссылка

Цветикова Л.Н., Попова Т.Н. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НАДФ-ИЗОЦИТРАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ В НОРМЕ, ПРИ ВВЕДЕНИИ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ-A И ДЕЙСТВИИ МЕЛАТОНИНА // Успехи современного естествознания. – 2009. – № 8. – С. 101-102;
URL: http://www.natural-sciences.ru/ru/article/view?id=14003 (дата обращения: 16.04.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074